Elektroforeza: kaj je, čemu služi in kako se izvaja

Vsebina

• Čemu je namenjena
• Kako se to naredi
• Vrste elektroforeze
• 1. Elektroforeza hemoglobina
• 2. Elektroforeza beljakovin

Elektroforeza je laboratorijska tehnika, ki se izvaja z namenom ločevanja molekul glede na njihovo velikost in električni naboj, tako da je mogoče diagnosticirati bolezni, preveriti izražanje beljakovin ali identificirati mikroorganizme.

Elektroforeza je preprost in poceni postopek, ki se uporablja v laboratorijskih rutinah in v raziskovalnih projektih. Glede na namen elektroforeze bo morda treba na primer opraviti druge teste in preiskave za diagnozo.

Čemu je namenjena

Elektroforezo lahko izvajamo za različne namene, tako v raziskovalnih projektih kot tudi v diagnostiki, saj gre za preprosto in poceni tehniko.Tako lahko elektroforezo opravimo na:

• Ugotovite viruse, glive, bakterije in parazite, pri čemer je ta aplikacija pogostejša v raziskovalnih projektih;
• Test očetovstva;
• Preverite izražanje beljakovin;
• Ugotovite mutacije, ki so na primer koristne pri diagnozi levkemije;
• Analizirajte vrste hemoglobina v obtoku, kar je koristno pri diagnozi anemije srpastih celic;
• Ocenite količino beljakovin, prisotnih v krvi.

Glede na namen elektroforeze bo za dokončanje diagnoze morda treba opraviti druge dopolnilne teste za zdravnika.

Kako se to naredi

Za izvedbo elektroforeze je potreben gel, ki je lahko poliakrilamid ali agaroza, odvisno od namena, pufer za elektroforezo in kad, marker molekularne teže in fluorescentno barvilo, poleg opreme za UV ali LED svetlobo, znane tudi kot transilluminator.

Po pripravi gela je treba postaviti določen predmet, tako da so vdolbinice narejene v gelu, imenovanem v glavnem glavnik, in pustiti, da se gel strdi. Ko je gel pripravljen, samo nanesite snovi v jamice. Za to je treba v eno vdolbinico postaviti označevalec molekularne teže, pozitivno kontrolo, to je snov, za katero se ve, kaj je, negativno kontrolo, ki zagotavlja veljavnost reakcije, in vzorce, ki jih je treba analizirati. Vse vzorce je treba zmešati s fluorescentnim barvilom, saj je tako mogoče vizualizirati trakove na transilluminatorju.

Gel z vzorci je treba vstaviti v posodo za elektroforezo, ki vsebuje določeno pufersko raztopino, nato pa napravo vklopiti tako, da pride do električnega toka in posledično potencialne razlike, kar je pomembno za ločevalne delce glede na njihovo obremenitev in velikost. Čas delovanja elektroforete se razlikuje glede na cilj postopka in lahko traja do 1 ure.

Po določenem času si je mogoče ogledati rezultat elektroforetskega teka skozi transilluminator. Ko je gel postavljen pod UV ali LED svetlobo, je mogoče vizualizirati pasovni vzorec: večja kot je molekula, manjša je njena migracija, bližje vdolbinici, medtem ko je lažja molekula, večji je selitveni potencial.

Za potrditev reakcije je treba vizualizirati pasove pozitivne kontrole, v negativni kontroli pa ničesar, saj je to sicer znak, da je prišlo do kontaminacije, in celoten postopek je treba ponoviti.

Vrste elektroforeze

Elektroforezo lahko izvajamo za različne namene in glede na njen namen lahko uporabimo več vrst gelov, najpogostejša pa sta poliakrilamid in agaroza.

Elektroforeza za identifikacijo mikroorganizmov se pogosteje izvaja v raziskovalnih laboratorijih, vendar se za diagnostične namene lahko elektroforeza uporablja za prepoznavanje hematoloških bolezni in bolezni, ki se razvijejo s povečanjem količine beljakovin, saj so glavne vrste elektroforeze:

1. Elektroforeza hemoglobina

Elektroforeza hemoglobina je laboratorijska tehnika, ki se izvaja za identifikacijo različnih vrst hemoglobina, ki krožijo v krvi, kar omogoča ugotavljanje prisotnosti bolezni, povezanih s sintezo hemoglobina. Tip hemoglobina se identificira z elektroforezo pri določenem pH, idealno med 8,0 in 9,0, z vzorcem pasov, ki ga lahko primerjamo z običajnim vzorcem, kar omogoča identifikacijo nenormalnih hemoglobinov.

Za kaj je namenjen: Elektroforeza hemoglobina se izvaja za raziskovanje in diagnosticiranje bolezni, povezanih s sintezo hemoglobina, kot so anemija srpastih celic in bolezen hemoglobina C, poleg tega pa je koristna tudi pri razlikovanju talasemije. Naučite se razlagati elektroforezo hemoglobina.

2. Elektroforeza beljakovin

Elektroforeza proteinov je izpit, ki ga zdravnik zahteva, da oceni količino beljakovin, ki krožijo v krvi, in tako ugotovi bolezni. Ta pregled se opravi iz vzorca krvi, ki ga centrifugiramo, da dobimo plazmo, del krvi, ki med drugim vsebuje tudi beljakovine.

Po elektroforezi je mogoče vizualizirati vzorec pasov, nato pa je graf, v katerem je navedena količina vsake frakcije beljakovin, bistven za diagnozo.

Za kaj je namenjen: Elektroforeza z beljakovinami omogoča zdravniku, da preuči pojav multiplega mieloma, dehidracije, ciroze, vnetja, bolezni jeter, pankreatitisa, lupusa in hipertenzije glede na pasovni vzorec in graf, predstavljen v poročilu o pregledu.

Razumeti, kako se to naredi in kako razumeti rezultat beljakovinske elektroforeze.